FLAERを用いたマルチカラーフローサイトメトリーによる発作性夜間ヘモグロビン尿症クローンのスクリーニング：再生不良性貧血患者212例を対象とした単施設研究
Screening of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Clones by Multicolor Flow Cytometry Using Fluorescent Aerolysin (FLAER) -A Single Centre Study of 212 Patients
Department of Hematology, Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences, Lucknow, Uttar Pradesh, India
発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）は非悪性のクローン増殖性造血幹細胞疾患で、X染色体PIGA遺伝子の体細胞変異により、GPIのアンカー型膜蛋白が欠損することで生じる。フローサイトメトリーによるGPIアンカー型蛋白欠損の同定は、PNH診断のゴールドスタンダードである。FLAERは細菌由来のチャネルホーミング蛋白アエロリジンの蛍光色素抱合不活性型変異体で、他のGPIと結合した抗体を用いてマルチカラー化することで、PNHクローンの検出感度が高まる。そのため、再生不良性貧血（AA）患者では小サイズのPNHクローンの検出に有用だと考えられる。そこで本研究では、本法を用いてAA患者のPNHクローンが検出できるかどうかを検討し、PNHクローンサイズと生化学的パラメータとの関連性を検討した。
AA患者212例（汎血球減少症のみ172例、溶血を伴う貧血25例、血栓症進行15例）を対象に、FLAERを用いたマルチパラメトリック・フローサイトメトリーを行い、PNHクローンサイズを測定した。臨床所見および臨床検査値は医療記録から調べ、生化学的パラメータとPNHクローンサイズとの関連性を検討した。
図 FLAERとCD24およびCD14による多形分析に基づくPNHクローンの検出
表 PNHクローンを伴うAA群と古典的PNH群の臨床検査値の比較
FLAERを用いたフローサイトメトリーにより、さまざまなサイズのPNHクローンを有するAA患者を検出できた。クローンサイズは生化学的パラメータおよび疾患重症度と相関した。AA患者のPNHクローンサイズは一般に小さいが、クローンサイズが大きい患者も存在した。クローンサイズが大きくても、溶血の生化学的パラメータに変化がなかったことから、治療対象となる患者は少なかった。また、ATG治療を受けたAA患者のクローンサイズは大きかったことから、定期的なモニタリングが必要だと考えられた。
フローサイトメトリーはPNH血球検出の必須ツールである。近年、顆粒球PNH血球の検出にFLAER法が用いられつつある。特に、検出感度が良いので再生不良性貧血などの造血不全疾患における微小PNH血球の検出にはFLAER法を用いるのが最適と考えられる。従来の方法では検出できなかった症例のPNH血球のフォローが容易に可能となった。従来の報告ではPNH血球が陽性の再生不良性貧血は比較的免疫抑制療法への反応が良いとされる。FLAER法の普及によって、造血不全疾患の病態解明が期待される。
NPO法人「PNH倶楽部」は、発作性夜間血色素尿症（PNH）患者と家族の会です。サポートセンター、医療費助成基金、活動等についての情報が掲載されています。
